Viêm xương khớp (OA) là một trong những bệnh thoái hóa xương mãn tính lâu dài ảnh hưởng đến người già trên 65 tuổi.
1]. Nói chung, bệnh nhân viêm khớp được chẩn đoán là sụn bị tổn thương, màng hoạt dịch bị viêm và tế bào sụn bị bào mòn, gây ra đau đớn và kiệt sức về thể chất [
2]. Đau khớp chủ yếu là do sụn khớp bị thoái hóa do viêm, khi sụn bị tổn thương nghiêm trọng, các xương có thể va chạm vào nhau gây đau đớn không thể chịu nổi và khó khăn về thể chất [
3]. Sự tham gia của các chất trung gian gây viêm với các triệu chứng như đau, sưng và cứng khớp đã được ghi nhận rõ ràng. Ở bệnh nhân viêm khớp, các cytokine gây viêm gây ra sự ăn mòn sụn và xương dưới sụn được tìm thấy trong dịch khớp [
4]. Hai phàn nàn chính mà bệnh nhân viêm khớp thường gặp phải là đau và viêm khớp. Vì vậy, mục tiêu chính của các liệu pháp điều trị viêm khớp hiện nay là giảm đau và giảm viêm. [
5]. Mặc dù các phương pháp điều trị viêm khớp hiện có, bao gồm cả thuốc không steroid và thuốc steroid, đã được chứng minh là có hiệu quả trong việc giảm đau và viêm, nhưng việc sử dụng lâu dài các loại thuốc này sẽ gây ra những hậu quả nghiêm trọng về sức khỏe như rối loạn chức năng tim mạch, dạ dày-ruột và thận.
6]. Vì vậy, một loại thuốc hiệu quả hơn với ít tác dụng phụ hơn phải được phát triển để điều trị viêm xương khớp.
Các sản phẩm sức khỏe tự nhiên đang ngày càng được ưa chuộng vì an toàn và dễ dàng có sẵn [
7]. Các loại thuốc truyền thống của Hàn Quốc đã chứng minh hiệu quả chống lại một số bệnh viêm nhiễm, bao gồm cả viêm khớp [
8]. Aucklandia lappa DC. được biết đến với các đặc tính y học, chẳng hạn như tăng cường lưu thông khí để giảm đau và làm dịu dạ dày, và đã được sử dụng theo truyền thống như một loại thuốc giảm đau tự nhiên [
9]. Các báo cáo trước đây cho thấy A. lappa có khả năng chống viêm [
10,
11], thuốc giảm đau [
12], chống ung thư [
13], và bảo vệ dạ dày [
14] các hiệu ứng. Các hoạt động sinh học khác nhau của A. lappa là do các hợp chất hoạt động chính của nó: costunolide, dehydrocostus lactone, dihydrocostunolide, costuslactone, α-costol, saussurea lactone và costuslactone [
15]. Các nghiên cứu trước đây cho rằng costunolide cho thấy đặc tính chống viêm trong lipopolysacarit (LPS), tạo ra các đại thực bào thông qua việc điều chỉnh NF-kB và con đường protein sốc nhiệt [
16,
17]. Tuy nhiên, chưa có nghiên cứu nào điều tra các hoạt động tiềm năng của A. lappa trong điều trị viêm khớp. Nghiên cứu hiện tại đã nghiên cứu tác dụng điều trị của A. lappa chống lại viêm khớp bằng cách sử dụng MIA (monosodium-iodoacetate) và mô hình gặm nhấm do axit axetic gây ra.
Monosodium-iodoacetate (MIA) được sử dụng nổi tiếng để tạo ra nhiều hành vi đau và các đặc điểm sinh lý bệnh của viêm khớp ở động vật [
18,
19,
20]. Khi tiêm vào khớp gối, MIA làm xáo trộn quá trình chuyển hóa tế bào sụn và gây ra các triệu chứng viêm và viêm, chẳng hạn như xói mòn sụn và xương dưới sụn, các triệu chứng chính của viêm khớp [
18]. Phản ứng quằn quại do axit axetic gây ra được nhiều người coi là sự mô phỏng cơn đau ngoại biên ở động vật nơi cơn đau do viêm có thể được đo lường một cách định lượng [
19]. Dòng tế bào đại thực bào chuột, RAW264.7, được sử dụng phổ biến để nghiên cứu phản ứng của tế bào đối với tình trạng viêm. Khi được kích hoạt bằng LPS, đại thực bào RAW264 kích hoạt các con đường gây viêm và tiết ra một số chất trung gian gây viêm, như TNF-α, COX-2, IL-1β, iNOS và IL-6 [
20]. Nghiên cứu này đã đánh giá tác dụng chống đau và chống viêm của A. lappa chống lại viêm khớp trên mô hình động vật MIA, mô hình động vật do axit axetic gây ra và tế bào RAW264.7 được kích hoạt bằng LPS.
2. Vật liệu và phương pháp
2.1. nguyên liệu thực vật
Rễ khô của A. lappa DC. được sử dụng trong thí nghiệm được mua từ Công ty TNHH Dược phẩm Epulip (Seoul, Hàn Quốc). Nó được xác định bởi Giáo sư Donghun Lee, Khoa dược lý thảo dược, Đại tá Y học Hàn Quốc, Đại học Gachon và số mẫu chứng từ được lưu giữ là 18060301.
2.2. Phân tích HPLC của chiết xuất A. lappa
A. lappa được chiết xuất bằng thiết bị hồi lưu (nước cất, 3 giờ ở 100°C). Dung dịch chiết được lọc và cô đặc bằng thiết bị bay hơi áp suất thấp. Chiết xuất A. lappa có hiệu suất 44,69% sau khi đông khô dưới −80 °C. Phân tích sắc ký của A. lappa được thực hiện với HPLC được kết nối bằng hệ thống HPLC 1260 InfinityⅡ (Agilent, Pal Alto, CA, USA). Để tách màu, cột EclipseXDB C18 (4,6 × 250 mm, 5 µm, Agilent) được sử dụng ở 35°C. Tổng cộng 100 mg mẫu thử được pha loãng trong 10 mL metanol 50% và siêu âm trong 10 phút. Các mẫu được lọc bằng bộ lọc ống tiêm (Waters Corp., Milford, MA, USA) 0,45 μm. Thành phần pha động là 0,1% axit photphoric (A) và axetonitril (B) và cột được rửa giải như sau: 0–60 phút, 0%; 60–65 phút, 100%; 65–67 phút, 100%; 67–72 phút, 0% dung môi B với tốc độ dòng 1,0 mL/phút. Nước thải được quan sát ở bước sóng 210 nm sử dụng thể tích bơm 10 µL. Việc phân tích được thực hiện trong ba lần.
2.3. Nhà ở và quản lý động vật
Chuột đực Sprague–Dawley (SD) 5 tuần tuổi và chuột ICR đực 6 tuần tuổi được mua từ Samtako Bio Korea (Gyeonggi-do, Hàn Quốc). Động vật được giữ trong phòng có nhiệt độ không đổi (22 ± 2 ° C) và độ ẩm (55 ± 10%) và chu kỳ sáng/tối là 12/12 giờ. Các con vật đã làm quen với điều kiện này hơn một tuần trước khi thí nghiệm bắt đầu. Động vật được cung cấp thức ăn và nước uống tùy ý. Các quy tắc đạo đức hiện hành về chăm sóc và xử lý động vật tại Đại học Gachon (GIACUC-R2019003) được tuân thủ nghiêm ngặt trong tất cả các quy trình thí nghiệm trên động vật. Nghiên cứu được thiết kế nghiên cứu mù và thử nghiệm song song. Chúng tôi đã thực hiện phương pháp an tử theo hướng dẫn của Ủy ban Đạo đức Thí nghiệm Động vật.
2.4. Tiêm và điều trị MIA
Chuột được chia ngẫu nhiên thành 4 nhóm, đó là nhóm giả, nhóm đối chứng, indomethacin và A. lappa. Được gây mê bằng hỗn hợp isofluorane O2 2%, chuột được tiêm 50 μL MIA (40 mg/m; Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, USA) vào khớp gối để dẫn đến viêm khớp thực nghiệm. Các phương pháp điều trị được tiến hành như sau: nhóm đối chứng và nhóm giả chỉ được duy trì với chế độ ăn cơ bản AIN-93G. Chỉ, nhóm indomethacin được cung cấp indomethacin (3 mg/kg) kết hợp với chế độ ăn AIN-93G và nhóm A. lappa 300 mg/kg được chỉ định cho chế độ ăn AIN-93G có bổ sung A. lappa (300 mg/kg). Các phương pháp điều trị được tiếp tục trong 24 ngày kể từ ngày gây viêm khớp với tỷ lệ 15–17 g trên 190–210 g trọng lượng cơ thể hàng ngày.
2.5. Đo trọng lượng mang
Sau khi gây ra viêm khớp, việc đo khả năng chịu trọng lượng của các chi sau của chuột đã được thực hiện bằng Máy đo khả năng chịu lực-MeterTester600 (IITC Life Science, Woodland Hills, CA, USA) theo lịch trình. Sự phân bổ trọng lượng ở hai chi sau được tính toán: khả năng chịu trọng lượng (%)
